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小鼠中腦多巴胺能神經(jīng)元細胞MN9D

 細胞特性

1 來(lái)源:多巴胺能神經(jīng)元細胞

2 含量:>1x106

3 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

4 規格:T25 瓶或者 1mL 凍存管包裝

運輸和保存:可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式:(1)干冰運輸,收到后

立即轉入液氮或者-80 度冰箱凍存或直接復蘇;(2)存活細胞,收到后應繼續生

長(cháng),傳代達到細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí),再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細胞培養步驟。

收到細胞后請拍照,3 天內如果發(fā)現污染,請及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。

細胞用途:僅供科研使用。

細胞接收后的處理:

1 收到細胞后,請檢查發(fā)貨培養瓶的狀況,若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細

胞有污染,請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2 在顯微鏡下確認細胞生長(cháng)狀態(tài)時(shí),最好在低倍鏡(4 5X 物鏡)下進(jìn)行,能

準確判斷細胞的傳代密度??醇毎男螒B(tài)請在 10X 20×物鏡下,同時(shí)給剛收

到的細胞拍照,(10×,20×)各 2-3 張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存,作為細

胞需要售后時(shí)提供收到細胞時(shí)細胞狀態(tài)的依據。

3

觀(guān)察好細胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h。

4 貼壁細胞:在運輸過(guò)程中貼壁細胞會(huì )有脫落的現象,如發(fā)現貼壁細胞有脫落

或者脫落后抱團生長(cháng),可將 T25 瓶置于 37℃培養箱放置約 2-3h,然后抽出瓶中

的培養基和未貼壁細胞 1000rpm 離心 5 分鐘,棄去上清重懸后接種到加有按照

說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基的原培養瓶中(或新的培養瓶中)。

5 懸浮細胞:T25 瓶置于 37℃培養箱放置約 2-3h,然后抽出瓶中的培養基和

細胞 1000rpm 離心 5 分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中(加入按照說(shuō)

明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基)。

6)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來(lái)培養細胞,請換用按照說(shuō)

明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基來(lái)培養細胞。 收到細胞后第一次傳代建

12 傳代 。

細胞培養步驟

一.培養基及培養凍存條件準備:

1)準備 1640 培養基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。

2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37 攝氏度,培養箱

濕度為 70%-80%。

3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。

二. 細胞處理:

1 復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加

4mL 培養基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補

1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜(或將

細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養基,培養過(guò)夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2 細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養。

對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 2ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于 37℃培

養箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況,若細胞大部

分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止

消化。

3. 6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4

鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 12 15 的比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者

瓶中。

第一次傳代推薦傳代比例為 1:2,以后傳代比例可根據客戶(hù)需要自己決

定。

3細胞凍存:待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細胞凍存。

下面 T25 瓶為例;

1.細胞凍存時(shí),棄去培養基后,PBS 清洗瓶底 1-2 次后加入 1ml 胰酶,細

胞變圓脫落后,加入 2ml 完全培養基終止消化,可使用血球計數板計數。

21000RPM 離心 5 分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加 DMSO 至最終濃度為

10%。加入 DMSO 后迅速混勻,按每 1ml 的數量分配到凍存管中,注意凍存

管做好標識。本公司按每個(gè)凍存管細胞數目大于 1X106 個(gè)細胞凍存。

3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,至少 2 個(gè)小時(shí)以后轉入液

氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項:

1. 收到細胞后,若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立

即與我們聯(lián)系。

2. 所有動(dòng)物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注

意防護,所有廢液及接觸過(guò)此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。