| 產(chǎn)品名稱(chēng) |
2V6.11 |
| 商品貨號 |
MZ-0328 |
| 中文名稱(chēng) |
人胚腎細胞 |
| 組織來(lái)源 |
腎; 用腺病毒5(Ad5)DNA轉化; 用腺病毒前區4質(zhì)粒DNA轉染。 |
| 形態(tài)特征 |
上皮細胞樣 |
| 生長(cháng)特性 |
貼壁生長(cháng) |
| 特征特性 |
這株細胞是2001年從人胚腎細胞株293衍化而來(lái)。293細胞用攜帶Zeocin-抗性標記的質(zhì)粒pVgRXR轉染得到293pVgRXR細胞。隨后,用包含編碼E424K的Ad5E4ORF6基因的質(zhì)粒pEKORF6轉染。pEKORF6從包含潮霉素抗性基因的質(zhì)粒pIndHydro衍生而來(lái)。載體包含SV40病毒序列。2V6.11細胞株最初從含潮霉素的培養液中用克隆環(huán)分離單克隆得到。2V6.11細胞誘導表達的人腺病毒E434KDa蛋白可通過(guò)免疫印跡法檢測。這株細胞可以用作研究腺病毒E4癌基因的工具。 |
| 細胞污染 |
HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。 |
| 培養條件 |
MEM培養基(GIBCO,貨號41500034，添加NaHCO3 1.5g/L，Sodium Pyruvate 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度。 |
| 傳代方法 |
消化3-5分鐘。1:2。3天內可長(cháng)滿(mǎn)。 |
| 細胞凍存步驟 |
待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時(shí)，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養基終止消化，可使用血球計數板計數。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。明舟生物按每個(gè)凍存管細胞數目大于1X106個(gè)細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
| 復蘇細胞步驟 |
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過(guò)夜）。第二天換液并檢查細胞密度。 |
| 細胞傳代步驟 |
如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。 |
| 凍存條件 |
基礎培養基+8%DMSO+20%FBS |
