中國倉鼠卵巢細胞(CTLA4 Ig-24)介紹：CHO 細胞以人CTLA-4 基因細胞外結構域序列和人IgCgamma1 的絞鏈區，CH2 和CH#區序列的融合結構轉染，構建了這株細胞。它們表達融合蛋白(CTLA4Ig)。

中國倉鼠卵巢細胞(CTLA4 Ig-24)特性：

1） 來(lái)源：中國倉鼠卵巢

2） 形態(tài)：可貼壁生長(cháng)（上皮細胞樣），也可懸浮生長(cháng)（圓球形）

3） 含量：>1x106 個(gè)/mL

4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規格：T25 瓶或者1mL 凍存管包裝

運輸和保存：使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml 凍存管發(fā)送存活細胞。收到細胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min 后，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養基后轉移至10cm 培養皿或者T25 培養瓶中培養，傳代達到細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細胞培養步驟。

中國倉鼠卵巢細胞(CTLA4 Ig-24)用途：僅供科研使用。

中國倉鼠卵巢細胞(CTLA4 Ig-24)培養步驟：

一．培養基及培養凍存條件準備：

培養條件：貼壁生長(cháng)時(shí)，選擇DMEM-H 培養基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L, 添加0.2 mM 脯氨酸,0.001 mM 氨甲蝶呤)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

[MTX 是基因DHFR 產(chǎn)物的抑制物。當培養基中存在MTX 時(shí)，MTX 可滲入細胞內與DHFR 蛋白結合，使核苷酸的合成受阻。但是DHFR 基因連同其附近幾千KB的DNA 還會(huì )擴增以滿(mǎn)足核苷酸合成的需要。理論上MTX 濃度越大，DHFR 基因擴增越多，與DHFR 基因連鎖的目的蛋白基因也表達得越多]

懸浮培養時(shí)，請使用懸浮生長(cháng)專(zhuān)用培養基，培養基為：EX-CELL CD-CHO CHOSerum-free Medium,Chemically Defined(Sigma-Aldrich,貨號：24361C)添加物：L-谷氨酰胺（Sigma-Aldrich,貨號：G8540-25G）Anti-Clumping Agent(Gibco，貨號：01-0057AE)

備注：CD-CHO CHO Serum-free Medium 請按照培養基配制說(shuō)明書(shū)配制，L-谷氨酰胺配制濃度為200mM，工作濃度為8mM（即稀釋25 倍，如500ml CHO Serum-freeMedium 中添加20ml 200mM L-谷氨酰胺，抗結團劑使用為1%，即500ml CHOSerum-free Medium 中添加5ml 抗結團劑）

1）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37 攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

2）凍存液：90%完全培養基（貼壁生長(cháng)凍存時(shí)）或90%懸浮培養基（懸浮生長(cháng)時(shí)），10%DMSO，現用現配。液氮儲存。

二．細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL 細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL 培養基混合均勻。在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，補加1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜（或將細胞懸液加入10cm 皿中，加入約8ml 培養基，培養過(guò)夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS 潤洗細胞1-2 次。

2. 加2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，補加1-2mL 培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1：2 到1：5 的比例分到新的含8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2 到1：5 的比例分到新的含8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2 到1：3 的比例分到新的含8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細胞凍存。貼壁細胞凍存時(shí)，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml 含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO 后進(jìn)行凍存。懸浮細胞凍存時(shí)，應將細胞收集，1000RPM 條件下離心4 分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO 后進(jìn)行凍存。

注意事項：

1. 收到細胞后，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動(dòng)物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過(guò)此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。