大鼠嗜堿性細胞白血病細胞(RBL-2H3)介紹:大鼠嗜堿性細胞白血病細胞(RBL-2H3)是1978 年國立牙科研究所的免疫學(xué)實(shí)驗室從Wistar 大鼠保持腫瘤狀態(tài)的嗜堿性細胞中分離和克隆出來(lái)的嗜堿性白血病細胞株。這些細胞具有高親和力的IgE 受體。通過(guò)集聚這些受體或與鈣離子載體協(xié)同作用可以激活它們分泌組胺及其他遞質(zhì)。大鼠嗜堿性細胞白血病細胞(RBL-2H3)廣泛地用于研究肥大細胞FcERI 和分泌的生化途徑。RBL-2H3 細胞是研究FcERI 結構的模型。它們廣泛地用于研究細胞分泌的不同方面，包括細胞內鈣濃度改變、磷酸脂酶激活、蛋白激酶和小G 蛋白的作用。雖然幾乎所有批號的FBS 都支持細胞的生長(cháng)，但在某些批號中FcERI 集聚后脫?；酶?。另一株大鼠嗜堿性細胞株(RBL，ATCC CRL-1378)不會(huì )脫?；?。

大鼠嗜堿性細胞白血病細胞(RBL-2H3)特性:

1） 來(lái)源：大鼠外周血

2） 形態(tài)：成纖維細胞

3） 含量：>1x106 個(gè)/mL

4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規格：T25 瓶或者1mL 凍存管包裝

運輸和保存：使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml 凍存管發(fā)送存活細胞。收到細胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min 后，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養基后轉移至10cm 培養皿或者T25 培養瓶中培養，傳代細胞達到細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細胞培養步驟。

大鼠嗜堿性細胞白血病細胞(RBL-2H3)用途：僅供科研使用。

大鼠嗜堿性細胞白血病細胞(RBL-2H3)培養步驟:

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備MEM 培養基(MEM， GIBCO，貨號41500034，添加NaHCO3 1.5g/L，丙酮酸鈉0.11g/L)，85%；優(yōu)質(zhì)熱滅活胎牛血清，15%，添加1% PS。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37 攝氏度。

3）凍存液：90%完全培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。

二．細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL 細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL 培養基混合均勻。在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，補加1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜（或將細胞懸液加入10cm 皿中，加入約8ml 培養基，培養過(guò)夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS 潤洗細胞1-2 次。

2. 加2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，補加1-2mL 培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1：2 到1：5 的比例分到新的含8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細胞凍存。貼壁細胞凍存時(shí)，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml 含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO 后進(jìn)行凍存。

注意事項：

1. 收到細胞后，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動(dòng)物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過(guò)此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。