常用的細菌接種方法有平板劃線(xiàn)分離法、斜面接種法、穿刺接種法、液體和半固體接種法、涂布接種法等。

一、平板劃線(xiàn)分離法

平板劃線(xiàn)分離法:是指把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細胞用接種環(huán)在平板培養基表面，通過(guò)分區劃線(xiàn)稀釋而得到較多獨立分布的單個(gè)細胞，經(jīng)培養后生長(cháng)繁殖成單菌落，通常把這種單菌落當作待分離微生物的純種。有時(shí)這種單菌落并非都由單個(gè)細胞繁殖而來(lái)的，故必須反復分離多次才可得到純種。其原理是將微生物樣品在固體培養基表面多次作“由點(diǎn)到線(xiàn)”稀釋而達到分離目的的。

為方便劃線(xiàn)，一般培養基不宜太薄，每皿約傾倒20ml培養基，培養基應厚薄均勻，平板表面光滑。劃線(xiàn)分離主要有分區劃線(xiàn)法和連續劃線(xiàn)法兩種（如圖1， A、B）。

圖1

分區劃線(xiàn)法是將平板分四區，故又稱(chēng)四分區劃線(xiàn)法。劃線(xiàn)時(shí)每次將平板轉動(dòng)60~70°劃線(xiàn)，每換一次角度，應將接種環(huán)上的菌燒死后，再通過(guò)上次劃線(xiàn)處劃線(xiàn)；

另一種連續劃線(xiàn)法是從平板邊緣一點(diǎn)開(kāi)始，連續作波浪式劃線(xiàn)直到平板的另一端為止，當中不需灼燒接種環(huán)上的菌。

1）連續劃線(xiàn)法

接種環(huán)于酒精燈外焰燒至紅透，接種棒也要充分灼燒，最后再集中燒接種環(huán)至紅。

輕輕搖勻待接種試管，左手手心托待接種試管底側部，右手執接種環(huán)，右手小指拔下試管塞，于酒精燈附近將接種環(huán)伸進(jìn)試管，稍候，再插入待接接種液中，蘸一下，取滿(mǎn)一環(huán)，抽出、燒塞、蓋蓋、放回試管架?；驅⒔臃N環(huán)通過(guò)稍打開(kāi)皿蓋的縫隙伸入平板，在平板邊緣空白處接觸一下使接種環(huán)冷卻，然后以無(wú)菌操作接種環(huán)直接取平板上待分離純化的菌落。

于靠近酒精燈處打開(kāi)平皿蓋約30°，右手將環(huán)伸進(jìn)平皿，將菌種點(diǎn)種在平板邊緣一處，輕輕涂布于瓊脂培養基邊緣（如圖2），抽出接種環(huán)，蓋上平皿蓋，然后將接種環(huán)上多余的培養液在火焰中灼燒，打開(kāi)平皿蓋約30°伸入接種環(huán)，待接種環(huán)冷卻后，再與接種液處輕輕接觸，開(kāi)始在平板表面輕巧滑動(dòng)劃線(xiàn)，接種環(huán)不要嵌入培養基內劃破培養基，線(xiàn)條要平行密集，充分利用平板表面積，注意勿使前后兩條線(xiàn)重疊，劃線(xiàn)完畢，關(guān)上皿蓋。灼燒接種環(huán)，待冷卻后放置接種架上。培養皿倒置于適溫的恒溫箱內培養（以免培養過(guò)程皿蓋冷凝水滴下，沖散已分離的菌落）。培養后在劃線(xiàn)平板上觀(guān)察沿劃線(xiàn)處長(cháng)出的菌落形態(tài)，鏡檢后再接種斜面。

 圖2

2）分區劃線(xiàn)法

取菌、接種、培養方法與“連續劃線(xiàn)法”相似。

分區劃線(xiàn)法分離時(shí)平板分四個(gè)區，故又稱(chēng)四分區劃線(xiàn)法。其中第4區是單菌落的主要分布區，故其劃線(xiàn)面積應最大。為防止第4區內劃線(xiàn)與1、2、3區線(xiàn)條相接觸，應使4區線(xiàn)條與1區線(xiàn)條相平行，這樣區與區間線(xiàn)條夾角最好保持120°左右。

先將接種環(huán)沾取少量菌在平板1區劃3~5條平行線(xiàn)，取出接種環(huán)，左手關(guān)上皿蓋，將平板轉動(dòng)60~70°，右手把接種環(huán)上多余菌體燒死，將燒紅的接種環(huán)在平板邊緣冷卻，再按以上方法以1區劃線(xiàn)的菌體為菌源，由1區向2區作第2次平行劃線(xiàn)。第2次劃線(xiàn)完畢，同時(shí)再把平皿轉動(dòng)約60~70°，同樣依次在3、4區劃線(xiàn)。劃線(xiàn)完畢，灼燒接種環(huán)，關(guān)上皿蓋，同上法培養，在劃線(xiàn)區觀(guān)察單菌落。