首先要為大家介紹下質(zhì)粒圖譜包含的四大要素
1、復制起點(diǎn)：控制著(zhù)質(zhì)粒的復制，并決定了質(zhì)粒的宿主和拷貝數；
2、篩選標記：多為抗性基因，以便加以檢測篩選；
3、多克隆位點(diǎn)：外源基因的插入位點(diǎn)；
4、其他元件：如轉錄調控元件、翻譯表達元件和蛋白標簽等。
以下就用大家常用的pcDNA3.1(+)表達載體作為案例
第一步：了解質(zhì)粒圖譜中的復制起點(diǎn)
如上圖譜中的ori表示質(zhì)粒的復制起點(diǎn)。質(zhì)粒的復制起點(diǎn)決定了質(zhì)粒的宿主及質(zhì)粒的拷貝數相關(guān)。若圖譜上只有一個(gè)ori，表示質(zhì)粒是原核克隆及表達質(zhì)粒。而圖譜上有兩個(gè)ori，則表示該質(zhì)粒是穿梭質(zhì)粒，既可以在原核也可以在真核中復制。
第二步：了解質(zhì)粒圖譜中的篩選標記
圖譜中的AmpR、KanR等表示質(zhì)粒載體中的篩選標簽，多為抗生素抗性基因，方便后續通過(guò)抗生素篩選陽(yáng)性克隆。只存在單抗性的質(zhì)粒多為原核克隆載體和原核表達載體。而存在兩種或以上的抗性的多為穿梭質(zhì)粒。
第三步：了解質(zhì)粒圖譜中的多克隆位點(diǎn)
圖譜中的MCS區或者許多內切酶集中的部分，就是質(zhì)粒的多克隆位點(diǎn)。多克隆位點(diǎn)為一系列限制性?xún)惹忻该盖形稽c(diǎn)，是外源DNA的插入位點(diǎn)，一般可通過(guò)酶切后連接的方式將外源DNA插入質(zhì)粒。多克隆位點(diǎn)一般位于轉錄啟動(dòng)和轉錄終止信號之間。
第四步：了解質(zhì)粒圖譜中其它元件
質(zhì)粒載體中除復制起始位點(diǎn)、篩選標記、多克隆位點(diǎn)外，還具有其他一些表達或調控元件，如轉錄調控元件、翻譯調控元件和融合表達標簽蛋白等。比如：
蛋白純化標簽蛋白：His-Tag，GST-tag等
蛋白檢測標簽蛋白：Myc-Tag，Flag-Tag，HA-Taq等
熒光蛋白表達標簽：GFP，mCherry等
