細胞名稱(chēng)：小鼠胰腺腺泡癌細胞
1） 來(lái)源：小鼠，胰腺
2） 形態(tài)：貼壁生長(cháng)，
3） 含量：>1x106
4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
運輸和保存
可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式：
（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇；
（2）存活細胞，收到后應繼續生長(cháng)，傳代達到細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細胞培養步驟。
收到細胞后請拍照，3天內如果發(fā)現污染，請及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。
細胞用途：僅供科研使用。
細胞接收后的處理
1） 收到細胞后，請檢查發(fā)貨培養瓶的狀況，若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2） 在顯微鏡下確認細胞生長(cháng)狀態(tài)時(shí)，最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，能準確判斷細胞的傳代密度?？醇毎男螒B(tài)請在10X和20×物鏡下，同時(shí)給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存，作為細胞需要售后時(shí)提供收到細胞時(shí)細胞狀態(tài)的依據。
3） 觀(guān)察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h。
4） 貼壁細胞：在運輸過(guò)程中貼壁細胞會(huì )有脫落的現象，如發(fā)現貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長(cháng)，可將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基的原培養瓶中（或新的培養瓶中）。
5） 懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中（加入按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基）。
小鼠胰腺腺泡癌細胞培養步驟
一．培養基及培養凍存條件準備
1） 準備DMEM 培養基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
二． 細胞處理
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過(guò)夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
注：第一次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據客戶(hù)需要自己決定。
3） 細胞凍存：待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細胞凍存。
下面T25瓶為例；
1．細胞凍存時(shí)，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養基終止消化，可使用血球計數板計數。
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個(gè)凍存管細胞數目大于1X106個(gè)細胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
注意事項
1. 收到細胞后，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2. 所有動(dòng)物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過(guò)此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
